Выбор криозащитной среды для витрификации суспензии эмбриональных фибробластоподобных клеток

Анотація

Визначали Ñклад кріозахиÑних Ñередовищ, Ñкі дозволÑÑŽÑ‚ÑŒ виключити криÑталізацію під Ñ‡Ð°Ñ ÑˆÐ²Ð¸Ð´ÐºÐ¾Ð³Ð¾ Ð·Ð°Ð¼Ð¾Ñ€Ð¾Ð¶ÑƒÐ²Ð°Ð½Ð½Ñ Ñ‚Ð° Ð²Ñ–Ð´Ñ–Ð³Ñ€Ñ–Ð²Ð°Ð½Ð½Ñ Ð² Ñтандартних кріопробірках, а також доÑліджували вплив екÑпозиції та кріоконÑÐµÑ€Ð²ÑƒÐ²Ð°Ð½Ð½Ñ Ð² цих Ñередовищах на життєздатніÑÑ‚ÑŒ ембріональних фіброблаÑтоподібних клітин. До Ñкладу розчинів, що вітрифікуютьÑÑ, вводили диметилÑульфокÑид (ДМСО), етиленгліколь (ЕГ), 1,2-пропандіол (1,2-ПД), Ñахарозу Ñ– візуально визначали криÑталізацію чи Ñ–Ñ— відÑутніÑÑ‚ÑŒ під Ñ‡Ð°Ñ Ð·Ð°Ð¼Ð¾Ñ€Ð¾Ð¶ÑƒÐ²Ð°Ð½Ð½Ñ Ñ‚Ð° відігріваннÑ. Ð”Ð»Ñ Ð²Ñ–Ñ‚Ñ€Ð¸Ñ„Ñ–ÐºÐ°Ñ†Ñ–Ñ— ÑуÑпензії клітин було відібрано два розчини: ДЕПС-1 (10% ДМСО, 20% ЕГ, 20% ПД, 0,5 Ðœ Ñахарози) Ñ– ДЕПС-2 (10% ДМСО, 15% ЕГ, 15% 1,2-ПД, 1 Ðœ Ñахарози). ПіÑÐ»Ñ ÐµÐºÑпозиції в ДЕПС-1 Ñ– ДЕПС-2 ÑпоÑтерігали Ð·Ð½Ð¸Ð¶ÐµÐ½Ð½Ñ Ð·Ð±ÐµÑ€ÐµÐ¶ÐµÐ½Ð¾ÑÑ‚Ñ– та ефективноÑÑ‚Ñ– Ð¿Ñ€Ð¸ÐºÑ€Ñ–Ð¿Ð»ÑŽÐ²Ð°Ð½Ð½Ñ ÐºÐ»Ñ–Ñ‚Ð¸Ð½ до плаÑтику в порівнÑнні з контролем. ПіÑÐ»Ñ Ð·Ð°Ð¼Ð¾Ñ€Ð¾Ð¶ÑƒÐ²Ð°Ð½Ð½Ñ-Ð²Ñ–Ð´Ñ–Ð³Ñ€Ñ–Ð²Ð°Ð½Ð½Ñ Ð² ДЕПС-2 збереженіÑÑ‚ÑŒ клітин знижувалаÑÑŒ на 30% в порівнÑнні з показником до заморожуваннÑ, а в ДЕПС-1 не змінювалаÑÑŒ Ñ– клітини проліферували в культурі. Показано можливіÑÑ‚ÑŒ вітрифікації ÑуÑпензії ембріональних фіброблаÑтоподібних клітин у багатокомпонентних кріозахиÑних Ñередовищах при швидкому заморожуванні в Ñтандартних плаÑтикових кріопробірках.