Разработка системной оптимизации протоколов криоконсервирования клеточных суспензий

Аннотация

Эффективное криоконÑервирование клеточных ÑуÑпензий ÑвлÑетÑÑ Ð²Ð°Ð¶Ð½Ð¾Ð¹ задачей криобиологии. Ðа оÑновании предыдущих иÑÑледований была разработана методика ÑиÑтемной оптимизации протоколов криоконÑÐµÑ€Ð²Ð¸Ñ€Ð¾Ð²Ð°Ð½Ð¸Ñ ÐºÐ»ÐµÑ‚Ð¾Ñ‡Ð½Ñ‹Ñ… ÑуÑпензий. Ð’ качеÑтве клеточной модели иÑпользовали кератиноциты человека. ИÑÑледование включало 48 протоколов Ñ Ñ€Ð°Ð·Ð»Ð¸Ñ‡Ð½Ñ‹Ð¼Ð¸ ÑкороÑÑ‚Ñми Ð¾Ñ…Ð»Ð°Ð¶Ð´ÐµÐ½Ð¸Ñ (B) в двухÑтупенчатых режимах (B1 в диапазоне от 4 до –30°С и Ð’2 от –30 до –80°С). Ð’Ñе протоколы изучали при четырех различных концентрациÑÑ… наиболее чаÑто применÑемого криопротектора диметилÑуфокÑида (ДМСО). РаÑтровый анализ около 600 образцов позволил изучить полный набор возможных переменных. Ð’ дальнейших иÑÑледованиÑÑ… Ð´Ð°Ð½Ð½Ð°Ñ Ð¼ÐµÑ‚Ð¾Ð´Ð¸ÐºÐ° была иÑпользована Ð´Ð»Ñ ÑƒÐ»ÑƒÑ‡ÑˆÐµÐ½Ð¸Ñ Ð¿Ñ€Ð¾Ñ‚Ð¾ÐºÐ¾Ð»Ð¾Ð² криоконÑÐµÑ€Ð²Ð¸Ñ€Ð¾Ð²Ð°Ð½Ð¸Ñ HPMEC-ST1.6R (легочные микроÑоÑудиÑтые Ñндотелиальные клетки человека). Результаты иÑÑÐ»ÐµÐ´Ð¾Ð²Ð°Ð½Ð¸Ñ Ð¿Ð¾ÐºÐ°Ð·Ð°Ð»Ð¸, что только определенное оптимальное Ñочетание ÑкороÑтей Ð¾Ñ…Ð»Ð°Ð¶Ð´ÐµÐ½Ð¸Ñ Ð¾Ð±ÐµÑпечивает выÑокий уровень выживаемоÑти клеток поÑле оттаиваниÑ. Ð”Ð»Ñ ÐºÐµÑ€Ð°Ñ‚Ð¸Ð½Ð¾Ñ†Ð¸Ñ‚Ð¾Ð² человека оптимальными протоколами Ð·Ð°Ð¼Ð¾Ñ€Ð°Ð¶Ð¸Ð²Ð°Ð½Ð¸Ñ Ð±Ñ‹Ð»Ð¸: охлаждение Ñо ÑкороÑтью 5 К/мин Ð´Ð»Ñ B1 и 7,5 К/мин Ð´Ð»Ñ Ð’2, либо 5 К/мин Ð´Ð»Ñ B1 и 10 K/мин Ð´Ð»Ñ Ð’2 при концентрации ДМСО 2,5%. Ðаиболее выÑокие показатели выживаемоÑти культуры клеток HPMEC-ST1.6R были доÑтигнуты при иÑпользовании Ñледующих протоколов: 5 K/мин (B1) в Ñочетании Ñ 5 K/мин (B2) (7,5% ДМСО); 3 К/мин в Ñочетании Ñ 3 К/мин (5 или 7,5% ДМСО); 10 K/мин (B1) в Ñочетании Ñ 3 К/мин (B2) (10% ДМСО).