Разработка системной оптимизации протоколов криоконсервирования клеточных суспензий

Анотація

Ефективне кріоконÑÐµÑ€Ð²ÑƒÐ²Ð°Ð½Ð½Ñ ÐºÐ»Ñ–Ñ‚Ð¸Ð½Ð½Ð¸Ñ… ÑуÑпензій Ñ” важливим завданнÑм кріобіології. Ðа підÑтаві попередніх доÑліджень була розроблена методика ÑиÑтемної оптимізації протоколів кріоконÑÐµÑ€Ð²ÑƒÐ²Ð°Ð½Ð½Ñ ÐºÐ»Ñ–Ñ‚Ð¸Ð½Ð½Ð¸Ñ… ÑуÑпензій. У ÑкоÑÑ‚Ñ– клітинної моделі викориÑтовували кератиноцити людини. ДоÑÐ»Ñ–Ð´Ð¶ÐµÐ½Ð½Ñ Ð²ÐºÐ»ÑŽÑ‡Ð°Ð»Ð¾ 48 протоколів з різними швидкоÑÑ‚Ñми Ð¾Ñ…Ð¾Ð»Ð¾Ð´Ð¶ÐµÐ½Ð½Ñ (B) в двоÑтупінчаÑтих режимах (B1 в діапазоні від 4 до –30°С Ñ– Ð’2 від –30 до –80°С). УÑÑ– протоколи вивчали при чотирьох різних концентраціÑÑ… кріопротектора диметилÑульфокÑиду (ДМСО), Ñкий вживаєтьÑÑ Ð½Ð°Ð¹Ð±Ñ–Ð»ÑŒÑˆ чаÑто. РаÑтровий аналіз близько 600 зразків дозволив вивчити повний набір можливих змінних. У подальших доÑлідженнÑÑ… дана методика була викориÑтана Ð´Ð»Ñ Ð¿Ð¾Ð»Ñ–Ð¿ÑˆÐµÐ½Ð½Ñ Ð¿Ñ€Ð¾Ñ‚Ð¾ÐºÐ¾Ð»Ñ–Ð² кріоконÑÐµÑ€Ð²ÑƒÐ²Ð°Ð½Ð½Ñ HPMEC-ST1.6R (легеневі мікроÑудинні ендотеліальні клітини людини). Результати доÑÐ»Ñ–Ð´Ð¶ÐµÐ½Ð½Ñ Ð¿Ð¾ÐºÐ°Ð·Ð°Ð»Ð¸, що тільки певне оптимальне Ð¿Ð¾Ñ”Ð´Ð½Ð°Ð½Ð½Ñ ÑˆÐ²Ð¸Ð´ÐºÐ¾Ñтей Ð¾Ñ…Ð¾Ð»Ð¾Ð´Ð¶ÐµÐ½Ð½Ñ Ð·Ð°Ð±ÐµÐ·Ð¿ÐµÑ‡ÑƒÑ” виÑокий рівень Ð²Ð¸Ð¶Ð¸Ð²Ð°Ð½Ð½Ñ ÐºÐ»Ñ–Ñ‚Ð¸Ð½ піÑÐ»Ñ Ð²Ñ–Ð´Ñ‚Ð°Ð²Ð°Ð½Ð½Ñ. Ð”Ð»Ñ ÐºÐµÑ€Ð°Ñ‚Ð¸Ð½Ð¾Ñ†Ð¸Ñ‚Ñ–Ð² людини оптимальними протоколами Ð·Ð°Ð¼Ð¾Ñ€Ð¾Ð¶ÑƒÐ²Ð°Ð½Ð½Ñ Ð±ÑƒÐ»Ð¸: Ð¾Ñ…Ð¾Ð»Ð¾Ð´Ð¶ÐµÐ½Ð½Ñ Ð·Ñ– швидкіÑÑ‚ÑŽ 5 К/хв Ð´Ð»Ñ B1 Ñ– 7,5 К/хв Ð´Ð»Ñ Ð’2 або 5 К/хв Ð´Ð»Ñ B1 Ñ– 10 K/хв Ð´Ð»Ñ Ð’2 при концентрації ДМСО 2,5%. Ðайбільш виÑокі показники виживаноÑÑ‚Ñ– культури клітин HPMEC-ST1.6R були доÑÑгнуті при заÑтоÑуванні наÑтупних протоколів: 5 K/хв (B1) у поєднанні з 5 K/хв (B2) (7,5% ДМСО); 3 К/хв у поєднанні з 3 К/хв (5 або 7,5% ДМСО); 10 K/хв (B1) у поєднанні з 3 К/хв (B2) (10% ДМСО).