Дополнительные научные формирования

Центр коллективного использования. Информация об оборудовании
Лазерный сканирующий микроскоп LSM 510 META

Конфокальный лазерный сканирующий микроскоп LSM 510 META компании Carl Zeiss имеет ряд преимуществ по сравнению с другими аналогичными системами и позволяет использовать следующие функции:

  • создание трехмерного (или четырехмерного с учетом времени) изображение образца с элементами объемной реконструкции, анимации и численного анализа;
  • сканирование в режиме мультитрекинга позволяет, в случае перекрывания эмиссионных спектров флуоресцентных красителей, последовательно использовать несколько лазерных линий (до 4-х) и соответствующих детектирующих каналов для получения чистого, разделенного на отдельные компоненты, мультифлуоресцентного изображения;
  • МЕТА-детектор позволяет получать информацию о спектральном распределении интенсивности эмиссионного сигнала;
  • использование наряду с обычным сканированием других технологий FRAP, FRET с количественной оценкой) для исследования определенной произвольно выбранного участка образца (ROI функция) любой геометрической формы.
FACSCalibur

Кратко о возможностях микроскопа:
Конфокальный лазерный сканирующий микроскоп LSM 510 META производится компанией Carl Zeiss, является модификацией LSM-микроскопов и имеет ряд неопровержимых преимуществ, по сравнению с аналогичными системами.
Прежде всего, модель LSM 510 META использует все характерные для всей серии LSM 510 функции:
- создание трехмерного (или четырехмерного с учетом временной координаты) изображение образца с элементами объемной реконструкции, анимации и количественного анализа
- сканирование методом мультитрекинга, которая позволяет в случае незначительного перекрывания эмиссионных спектров флуоресцентных красителей, последовательно использовать несколько лазерных линий и соответствующих детекционых каналов для получения чистого, разделенного на отдельные компоненты, мультифлуоресцентного изображения
- использование вместе с обычным сканированием других технологий (FRAP, FRET с количественной оценкой) для исследования определенного произвольно выбранного участка исследуемого образца (ROI функция) любой геометрической формы благодаря системе AOTF (акустооптический плавнорегулируемый фильтр), которая позволяет мгновенно с шагом в 0,1% изменять интенсивность каждой лазерной линии от 0 до 100%
Тем не менее главной изюминкой LSM 510 META, ее отличительной особенностью, есть наличие 32-канального метадетектора.
Пройдя через конфокальную диафрагму, эмиссионный сигнал, предварительно разложенный на спектральные компоненты, одновременно детектируется в 32 независимых высокочувствительных каналах. Таким образом, каждая сканируемая точка (пиксель) кроме трех координат несет также и информацию о спектральном распределении интенсивности (Lambda Stack), что в дальнейшем позволяет анализировать мультифлуоресцентное изображение с высокой степенью разделения спектральных профилей на компоненты, независимо от степени их перекрывания.
Функция несмешивемого линейного разделения позволяет пиксел за пикселем прецезионно разделять суммарный сигнал на составные части и идентифицировать спектр каждого флуоресцентного красителя по отдельнолсти. В качестве спектров сравнения используют индивидуальные эмиссионные спектры флуоресцентных маркеров (технология “Эмиссионная дактилоскопия”).
Одновременное применение в конфокальном микроскопе LSM 510 META технологий мультитрекинга и эмиссионной дактилоскопии позволяет устранить проблему перекрытия флуоресцентных эмиссионных спектров при мультифлуоресцентном анализе изображений.

Задачи, которые можно решить при помощи конфокального микроскопа:
Одной из главных сфер применения конфокального микроскопа, обусловленой его высокой раздельной способностью и контрастом, является исследование структуры клеток и их органоидов, например, цитоскелета, ядра, хромосом, или даже локализации в них отдельных генов.
Конфокальную микроскопию применяют также для исследования колокализации в клетке двух или большего количества веществ, например, белков. Такие исследования помогают лучше понять, существует ли между ними причинно-следственная связь. Предварительно белки помечают антителами с разными флуорохромами. С помощью обычного микроскопа тяжело определить, находятся они рядом или один под другим. С помощью конфокальной микроскопии это можно определить. Сохранив в памяти компьютера серию оптических срезов, можно провести объемную реконструкцию образца и получить его трехмерное изображение, не используя трудоемкую методику изготовления и фотографирование серийных гистологических срезов.
Еще одной задачей для конфокальной микроскопии есть исследования динамических процессов, которые происходят в живых клетках. Например, движение катионов кальция и других веществ через клеточные мембраны. Это можно исследовать на высокоскоростном конфокальном микроскопе.
Новыми перспективными направлениями в конфокальной микроскопии есть методики FRAP (Fluorescence Recovery After Photobleaching - Восстановление флуоресценции после фотовыжигания) и FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer) - Передача энергии с помощью флуоресцентного резонанса. FRAP используют для исследований подвижности биоорганических молекул путем инициации фотохимического расписания флуорохрома в зоне облучения и дальнейшего его разъединение с молекулами. После выжигания молекулы с флуорохромом из незасвеченной зоны двигаются вследствие диффузии в засвеченную зону образца. По времени нарастания в ней флуоресценции можно делать вывод о подвижности молекул.
FRET применяют для определения расстояния между молекулами разных типов, их взаимодействия и окружение. Молекулы метят двумя флуорохромами со спектром излучения донора, который перекрывается спектром поглощения акцептора. В результате резонанса между энергетическими уровнями энергия от донора передается к акцептору, который находится рядом на расстоянии порядка нескольких нанометров. Вероятность резонанса зависит от расстояния между молекулами, поэтому ее можно измерять с помощью конфокального микроскопа, регистрируя энергию, которая излучается акцептором в видимой области спектра.

Положение о Центре коллективного пользования и порядок предоставления услуг.

Данный прибор находится в отделе низкотемпературного консервирования.

Web-сайт фирмы-производителя


Наш адрес:
Украина, 61015, Харьков, ул. Переяславская 23,
Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины
Тел: +38 (057) 373-41-43,   373-38-07,   373-30-39;     Факс: +38 (057) 373-59-52
E-mail: cryo@online.kharkov.ua